1. Рекомендации по формированию ремонтно-маточных стад для икорного осетроводства с применением биохимических, гормональных и ультразвуковых методов

1.1. Методика проведения исследований


Отбор крови осуществлялся прижизненно из хвостовой вены с соблюдением ветеринарносанитарных правил и принципов гуманного отношения к животным.


Отбор материала и работа с ним проводятся в спецодежде, одноразовых перчатках. Сгустки крови и сыворотка крови перед утилизацией в общую канализационную сеть обезвреживаются только с применением дезинфицирующих растворов (в соответствии с действующими инструкциями по обеззараживанию). Наконечники, микропробирки, пробирки, пипетки и другие приборы, используемые при работе с кровью и сывороткой крови, обеззараживаются в 6%ном растворе перекиси водорода с экспозицией 3 ч в термостате или сушильном шкафу при температуре 50 °С. После этого промываются под проточной водой, затем – 3–5 мин в дистиллированной воде и высушиваются в термостате или сушильном шкафу при 60–100 °С в течение 15 мин. Отработанные наконечники, микропробирки, пробирки, пипетки и другие приборы, используемые при работе с кровью и сывороткой крови, складываются в течение рабочего дня в емкости с дезинфицирующим раствором до полного вертикального погружения. Рабочие поверхности лабораторных столов обеззараживаются 70%ным спиртом с последующим фламбированием. Дезинфекционная обработка оборудования (центрифуги, микроскопы, холодильники и др.) проводится 70%ным спиртом. После каждого контакта с биологическим материалом тщательно моются руки, а использованные одноразовые перчатки утилизируются.
Кровь отбирается в утреннее время, до кормления. Процесс отбора крови должен быть максимально безболезненным и быстрым (не более 30 с). Кровь отбирается в чистые, сухие пробирки. Для биохимических исследований отбирается венозная кровь в объеме 3 мл. Полученный материал сразу же закрывается пробками, чтобы не допустить контакта с внешней средой. Для получения сыворотки крови антикоагулянт не добавляется. Ее получают после свертывания крови при температуре 18–20 ºС с последующим охлаждением при температуре 4 ºС и цен
5
трифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин на лабораторной центрифуге.
В полученной сыворотке крови определяется активность αгидроксибутиратдегидрогеназы (LDH1), γглютамилтрансферазы (GGT), лактатдегидрогеназы (LD), aспартатаминотрансферазы (AST), щелочной фосфатазы (ALP), аланинаминотрансферазы (ALT), концентрация полного белка (TP), альбумина (Alb), холестерина (Chol), неорганического фосфора (Phosphorus), лактатдегидрогеназы (LDH), триглицеридов (TG), кальция (Ca), мочевой кислоты (UA). Все исследования проводились при температуре 25 °С с использованием реактивов фирмы Cormay.
При проведении иммуноферментного анализа в полученной сыворотке крови определяют концентрации следующих гормонов: лютеинизирующий гормон (ЛГ), фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), хорионический гонадотропин (ХГ), прогестерон, эстрадиол, тестостерон, дегидроэпиандростерон (ДЭАС), кортизол.
Для проведения УЗИдиагностики рыб используют сканер Mindray DP6600 (или любой другой ветеринарный сканер, обладающий необходимыми характеристиками), который оснащен линейным датчиком с размерами рабочей поверхности 40–60 мм и рабочей частотой 5–10 МГц. Для четкой визуализации гонад рыб необходимо, чтобы минимальный линейный размер гонад на гистологическом срезе превышал длину ультразвуковой волны минимум в 10–20 раз, в противном случае границы органов будут нечеткими или не будут видны. Отражение большей части звуковых волн происходит в направлении источника звука. Поэтому для получения четкого изображения ультразвуковой пучок направляется к исследуемому органу под углом 90°, обеспечивающим максимальное отражение и последующую визуализацию.
Ультразвуковое экспрессисследование гонад осетровых рыб проводится во фронтальной (продольной) или поперечной плоскостях. При проведении диагностики датчик плотно прижимается к поверхности тела в районе 3–4й брюшных жучек так, чтобы один край датчика находился прямо над жучками. Периодическими наклонами датчика влевовправо определяется оптимальный продольный разрез. Далее датчик медленно перемещается в выбранной плоскости в направлении головы.