Рекомендации по проведению инкубации артемии для кормления рыбопосадочного материала ценных видов рыб

Кормление молоди осетровых, перешедшей на активное питание, безусловно, является одним из важнейших этапов в производственном процессе осетроводства. На сегодняшний день существуют недостаточно комбинированные корма для осетровых рыб, позиционируемые производителями как стартовые. Некоторые из них, действительно, довольно полно удовлетворяют потребности молоди, однако значимость живых кормов в этот период трудно переоценить.

Как правило, в качестве стартового корма для молоди осетровых в хозяйствах используют науплии жаброногого рачка – артемии (Artemia salina). Преимущества артемии хорошо известны: длительный срок хранения сухих науплий; отсутствие сложностей при транспортировке; простота и удобство получения науплий, пригодных для скармливания – все это делает артемию самым подходящим объектом для вскармливания молоди рыб.
Методика инкубации цист артемии. Для инкубации цист артемии используют прозрачные конусовидные сосуды вместимостью 200 л. Высокое содержание кислорода и перемешивание яиц в аппарате осуществляется путем аэрации воды с помощью компрессора, распылители которого устанавливаются в донной части аппарата. Над аппаратами обеспечивается постоянное интенсивное (2000 лк) искусственное освещение. Для инкубации активированные яйца артемии помещают в 4–5%ный раствор поваренной соли (NaCl). Плотность закладки яиц зависит от их качества и размера и составляет в среднем 4–5 г/л. В инкубационном аппарате необходимо поддерживать температуру 27–29 °С, рН 7,5–8,5. При этих условиях выклев науплий происходит через 24–30 ч после закладки яиц. По завершении инкубации на 15 мин выключается свет и компрессор. В результате оболочки всплывают вверх, а науплии концентрируются в нижней части аппарата. После этого через сливной кран сначала сливаются мертвые и непроклюнувшиеся цисты (скапливающиеся в нижней конической части), а затем в мешок из газсита (114 мкм) сливают науплий. Полученных науплий либо сразу скармливают, либо помещают в бассейны с 3–5%ным раствором соли для дальнейшего подращивания, либо замораживают.
179
Рекомендуется проводить предварительную обработку (активацию и декапсуляцию) яиц артемии перед их инкубацией. Яйца артемии покрыты хитиновой оболочкой, что хорошо защищает их от внешних воздействий, но и доставляет аквариумисту немало хлопот.
Эта оболочка значительно снижает процент выхода рачков из яиц при инкубации. Кроме того, любителю необходимо будет отделять выклюнувшихся науплий от мертвых яиц и пустых оболочек, что может быть не так просто.
Декапсулированные эмбрионы более калорийны и энергичны, так как они не расходуют энергию на разрыв хитиновой оболочки. А успешно проведенная декапсуляция иногда позволяет обойтись вообще без инкубации яиц. Например, подросшая молодь и многие взрослые рыбы с удовольствием съедят декапсулированные, но неинкубированные яйца артемии: для них это будет очень питательный и легкоперевариваемый корм. Очень любят такой корм рыбы, подбирающие его со дна: барбусы, некоторые цихлиды, сомы, а также креветки и крабы.
Активация способствует прерыванию диапаузы яиц и повышению процента выхода личинок (стоит отметить, что у яиц, продающихся в зоомагазинах в товарной упаковке, этот процесс уже прерван). Она напоминает им холодную зиму, после которой они быстрее выйдут из своей скорлупы, а также дадут лучший процент «всхожести».
Существуют следующие способы активации яиц артемии:
1. Сухие яйца кладутся в раствор поваренной пищевой или аптечной морской соли (35–47 г/л) и промораживаются при температуре –15–20 ºС в течение однойдвух недель, затем в раствор бросают таблетку гидроперита (1 таблетка на 400 см3 раствора), далее через 20–30 мин яйца промывают под краном водопроводной водой (5–10 с).
2. Сухие яйца кладутся в раствор поваренной пищевой или аптечной морской соли (35–47 г/л) и промораживаются при температуре –25 ºС в течение 1–2 мес.
3. Сухие яйца кладутся на 30 мин в 3%ный раствор перекиси водорода (50 г яиц на 1 л раствора), промываются и кладутся в инкубатор. Это лучший способ активации при отсутствии морозильника.
4. Сухие яйца кладутся на 2 ч в пресную воду, имеющую температуру 25–30 ºС, далее отцеживаются и помещаются на сутки в раствор поваренной пищевой или аптечной морской соли (35–47 г/л). Данная операция повторяется три раза.
5. Если нет возможности проморозить яйца при температуре –25 ºС, то можно положить их в морозильник в солевом растворе, приготовле
180
ние которого описано выше, на срок от одного дня до двух месяцев перед инкубацией.
При кормлении артемией рыб, планируемых на нерест, лучше всего подойдет второй вариант, с промораживанием не менее двух месяцев. После активации в морозильнике яйцам дают 3–4 дня отстояться при комнатной температуре перед инкубацией.
Методика декапсуляции цист артемии. Для улучшения технологии выклева артемии используют декапсуляцию. Метод декапсуляции цист артемии изначально применялся только для исследовательских целей, а позднее был широко внедрен в промышленную аквакультуру. Рыбоводамипрактиками по достоинству была оценена возможность массового получения лишенных оболочек цист артемии в качестве стартового корма, обладающего отличными биохимическими характеристиками.
Декапсуляция – растворение хориона при сохранении живого зародыша – технологический прием, который может дать сильный импульс продвижению хозяйственного освоения артемии, поскольку эта операция резко улучшает показатели использования цист: делает излишним отделение науплий от скорлупы и неразвившихся цист, повышает «всхожесть» цист, жизнестойкость и энергетическую ценность науплий, дает гарантию от привнесения с кормом болезнетворного начала и др.
Декапсуляция цист, выполненная перед инкубацией, имеет несомненные достоинства получения науплий из нативных цист. Объясняется это тем, что неразвившиеся цисты и скорлупу очень трудно отделить от живых науплий. Будучи же заглоченными, они могут стать причиной закупорки кишечника личинок. Особенно часто это встречается у молоди стерляди и других видов, чьи личинки отличаются мелкими размерами. Кроме того, на внешней поверхности скорлупы иногда встречаются споры бактерий и растений, что также может быть небезопасным. Из цист, лишенных скорлупы, вылупляются науплии, обладающие большим запасом энергии, поскольку последняя не расходуется на работу по разрыву скорлупы и выходу из нее.
Применение декапсулированных цист непосредственно в качестве стартового корма имеет следующие преимущества: отпадает необходимость в инкубации, следовательно, не нужны инкубационные аппараты и среды, специальные помещения, системы обогрева, подачи сжатого воздуха. Исключается или резко сокращается расход электроэнергии. Не требуется отделять корм от скорлупы и неразвившихся
181
цист. Процесс сокращается с 48 ч до 20 мин. Устраняется зависимость производства от крайне непостоянного показателя – величины «всхожести» цист: практически все цисты используются как стартовый корм. Устраняется опасность занесения с кормом болезней рыб.
Применение метода декапсуляции заключается в следующем: сухие яйца необходимо в течение часа подержать в пресной воде, а затем поместить в следующий раствор: 50 г гипохлорита кальция и 16 г кальцинированной соды на 1 л воды. Данные вещества тщательно перемешиваются в течение 1–1,5 мин и отстаиваются, затем сливается осадок. Соотношение объемов яиц и раствора должно быть 1:10. В целом, для декапсулирования яиц подойдут препараты, содержащие активный хлор: диоксид хлора, гипохлорит натрия, гипохлорит кальция, хлорная (белильная) известь (оптимальная концентрация активного хлора в растворе 17 г/л при температуре около 20 °С). Примерная концентрация этих веществ в растворе должна быть следующей: гипохлорит кальция – 3 %, хлорная известь – 6 %, гипохлорит натрия – 9 %. Но необходимо соблюдать осторожность: декапсулирующий раствор – это едкая жидкость, которая может разъесть кожу рук, также она не должна попадать в глаза, рот, нос.
Декапсуляция длится до часа (обычно не более получаса): раствор с яйцами постоянно перемешивается вручную или посредством пузырьков от компрессора (яйца должны быть постоянно в движении). По мере своего разрушения оболочки яиц приобретают оранжевый цвет. Декапсулированные яйца могут сразу же скармливаться малькам, необходимо лишь промыть их в течение 8–10 мин проточной теплой водой. В сачках применяются только капроновые материалы (шелк разъедается хлором), емкости должны быть стойкими к коррозии.
Декапсулированные яйца хорошо хранятся в холодильнике, в плотно закрытой банке. Рекомендуется перед скармливанием замочить их в воде на 15–20 мин или залить горячей водой на 3–5 мин. Если же необходимо «законсервировать» продукт, то его хранят в насыщенном солевом растворе в течение нескольких месяцев, а по мере необходимости инкубируют или скармливают. В таком растворе личинки рачков обезвоживаются и у них приостанавливаются процессы жизнедеятельности. Для того чтобы вернуть их в нормальное состояние, необходимо положить эмбрионов в раствор с соленостью менее 80 ‰.
Выращивание артемии в бассейнах. Разводить, выращивать артемию можно в таких же нефильтрующих бассейнах, которые применяются для разведения ветвистоусых рачков, но изготовленных из соле
182
устойчивого бетона или пластика. Для этого в бассейнах создают соленость от 40–50 ‰ и запускают взрослых артемий (10 г на 1 м3) или вносят яйца артемии из расчета 500–600 г/м3. В природе главной пищей рачков А. salina является микроводоросль Dunaliella salina, а также бактерии грунта и органические остатки. Для развития протококковых водорослей в бассейн вносят культуру Chlorella (1 млн. клеток на 1 мл) и растворенные в воде соли (из расчета 0,1 кг/м3 глауберовой соли (сернокислого натрия), 0,05 кг/м3 азотнокислого калия и 0,05 кг/м3 суперфосфата).
В качестве корма для артемии можно использовать кормовые дрожжи, которые вносят в растворенном виде по всей площади бассейна из расчета 0,01 кг/м3. Начиная с третьего дня после вылупления науплий кормовые дрожжи вносят 1 раз в 5 суток из расчета 20 г/м3. Когда рачки Artemia становятся половозрелыми, частоту кормления увеличивают до 1 раза в 3 суток, а при их массовом размножении кормовую норму повышают до 35 г/м3. Оценивать условия содержания артемии и обеспеченность ее кормом можно визуально по поведению рачков. Равномерное распределение артемий в толще воды указывает на нормальные условия среды, их скопление у дна и стенок бассейна характеризует недостаточность кормовой базы. Концентрация рачков у поверхности воды и их замедленные движения свидетельствуют о дефиците кислорода. Отлов артемий начинают, когда в бассейне на одну половозрелую особь приходится не менее десяти неполовозрелых рачков. В этом случае допустимая норма изъятия культуры составляет 1/3–1/2 всей биомассы или 100–120 г/м3. Для получения устойчивого выхода продукции необходимо поддерживать в бассейнах стабильную концентрацию поваренной соли и содержание растворенного в воде кислорода (на уровне не менее 4 мг/л), способствующих выклеву науплий. По окончании рыбоводного сезона яйца артемии можно оставлять в бассейнах на зиму.
Биоинкапсуляция науплий артемии. Для снижения коэффициента конверсии корма и, соответственно, увеличения выживаемости, темпов роста личинок и их устойчивости к стрессу рекомендуется использовать метод биоинкапсуляции – обогащение науплий артемии ω3 высоконенасыщенными жирными кислотами.
Схема обогащения (биоинкапсуляция) науплий артемии
Рис. 137. Схема обогащения (биоинкапсуляция) науплий артемии
(NF – раствор фуразолидона, 3 мг/л)
Для повышения темпов роста и качества личинок осетровых также используют способ биоинкапсуляции науплий артемии пробиотиками. Науплии артемии перед использованием в кормлении личинок осетровых выдерживают в течение 10 ч в бактериальной суспензии (Bacillus licheniformis, B. subtillis, B. polymixa, B. laterosporus, B. circulans – коммерческое название «Protexinaquatic»). Наилучшие результаты при кормлении личинок шипа (А. nudiventris) биоинкапсулированными науплиями Artemia urmiana были получены при использовании концентраций бактериальной суспензии 3×105 бактерий/мл (КОЕ/мл).
Существует множество доступных препаратов для обогащения артемий. Так как эти продукты имеют различный состав, питательную ценность и протоколы обогащения, то решать, какой из них наиболее подходит для условий выращивания и определенных видов рыб надлежит менеджерам по выклеву яиц. Когда препарат для обогащения уже выбран, важно вести стандартизированный протокол и неуклонно ему следовать. Небольшие изменения в температуре или времени обогащения, например, могут сильно влиять на размер и питательные качества получаемого продукта. Получение витаминизированных артемий требует запаса времени в два дня: первый день необходим для
Время после начала инкубации, ч
184
выклева артемий, второй день – для их обогащения. Чтобы облегчить этот процесс, необходим второй резервуар, специально для витаминизации. Как и в случае с выклевом, идеальным будет резервуар с коническим дном, что поможет обеспечить тщательное смешивание артемий и полное высыхание их во время сбора. Перед процедурой резервуар для обогащения необходимо наполнить подходящим количеством воды, причем параметры качества воды (температура, соленость и pH) должны быть отрегулированы таким образом, чтобы соответствовать условиям, описанным выше. Важно начинать процесс обогащения с использования здоровых, высококачественных науплий. Науплии, которые еще до обогащения были вялыми или поврежденными, в результате станут субоптимальным питательным веществом. Необходимо аккуратно удалять пустые яйца (недекапсулированные яйца) и мембраны после выклева (от декапсулированных яиц) таким образом, как описано в разделе о выклеве яиц артемии. Науплии артемии также должны быть хорошо промыты перед помещением в резервуар для обогащения. Это особенно важно при использовании в процессе выклева таких добавок, как INVE’s Hatch Controller и пеногаситель, так как ингредиенты этих продуктов могут помешать процессу обогащения. Во время процесса обогащения необходимо установить энергичную аэрацию через дно резервуара, а также тщательно отслеживать уровень растворенного кислорода в течение всего процесса. Во время этой стадии скорее всего понадобится использование дополнительного кислорода, чтобы поддерживать уровень кислорода более 4 мг/л. Следует поддерживать температуру на уровне 25 °C с помощью подводных нагревателей либо горстки льда, в зависимости от окружающих условий. В конце процесса обогащения вся масса воды должна быть процежена сквозь сачок (125 мкм) со значительной аэрацией, чтобы обогащенные артемии не оседали. Уровень кислорода в сачке необходимо тщательно отслеживать. Артемии тщательно промывают в течение 5 мин или до тех пор, пока вытекающая вода не станет прозрачной.
Методика оценки эффективности выклева артемии и проведения инкубации в условиях in vitro. Сначала осуществляют процедуру гидратации, т. е. цисты насыпают в воду на 1–2 ч. За это время они набухают, что облегчит декапсуляцию. Оптимальное количество артемии для декапсуляции устанавливают в процессе собственного опыта. Начинать рекомендуется с 1–1,5 чайной ложки. 185

Начинать рекомендуется с 1–1,5 чайной ложки
После гидратации цисты процеживают. Для этого можно использовать какуюнибудь мелкую ткань. Лучше изготовить такую конструкцию, чтобы сетка или ткань находилась в натянутом состоянии. 

Лучше изготовить такую конструкцию, чтобы сетка или ткань находилась в натянутом состоянии
187

Далее цисты помещают в 70%ный спирт
Далее цисты помещают в 70%ный спирт. Время зависит от интенсивности перемешивания: при периодическом помешивании – 2 мин, без перемешивания – 5 мин.

Время зависит от интенсивности перемешивания: при периодическом помешивании – 2 мин, без перемешивания – 5 мин.
После спирта цисты обильно промывают. Далее их помещают в белизну. Время зависит от интенсивности перемешивания: при периодическом помешивании – 2 мин, без перемешивания – 4 мин. Время нужно контролировать очень четко, так как передержка токсически действует на цисты и науплии. Оптимальное время (от 1 до 5 мин) подберется в процессе собственного опыта, так как концентрация гипохлорита натрия в белизне несколько изменяется в зависимости от производителя. 

 

концентрация гипохлорита натрия в белизне несколько изменяется в зависимости от производителя.


Заранее готовят среду для инкубации. Для этого артезианскую воду в течение 5–10 мин аэрируют с помощью аквариумного компрессора.

Для этого артезианскую воду в течение 5–10 мин аэрируют с помощью аквариумного компрессора.
189
После аэрации в воду добавляют пищевую соль (не йодированную!!!) в количестве 1 чайная ложка на 250 мл воды.

После аэрации в воду добавляют пищевую соль (не йодированную!!!) в количестве 1 чайная ложка на 250 мл воды.


После декапсуляции в белизне цисты процеживают и обильно промывают (очень важно после белизны обильно промыть их до отсутствия запаха хлора).
Затем цисты разносят по чашкам Петри или другим лабораторным контейнерам. Важно не давать цистам после декапсуляции подсыхать, иначе они будут слипаться. Для отбора и разноса цист по чашкам Петри необходимо подобрать единый инструмент. Можно использовать наконечник от дозатора, трубку от стержня шариковой ручки, трубочку от ватной палочки и т. п. Объем цист для каждой чашки Петри – около 1/3 спичечной головки. Это примерно 500–1 000 цист. Перед тем как цисты поместить в чашки Петри, в них наливают инкубирующую среду – около 500–1 000 мл (это предотвратит цисты от подсыхания во время воздействия какогонибудь физического фактора). В среду помещают цисты круговыми движениями, чтобы они распространились как можно дальше друг от друга (для предотвращения слипания). Объем среды зависит от используемых емкостей. Как правило, уровень инкубирующей среды в емкости должен составлять 5–7 мм (для 4сантиметровой чашки Петри – это 5 мл раствора). Далее чашки Петри маркируют и помещают для инкубации при температуре не менее 25 ºС (наиболее оптимальная 28–29 ºС). Можно инкубировать в условиях полного затемнения (например, в термостатах). В зависимости от

190
температуры выклев начнется через 24 ч (единичные особи). Массовый выклев науплий – через 48 ч.
Чашки Петри фотографируют цифровым фотоаппаратом с включенной функцией макросъемки. Для фотографирования лучше использовать штатив. Если есть возможность, то фотоаппаратом лучше управлять с компьютера с помощью специализированной программы (в зависимости от модели фотоаппарата, например Adobe Photoshop Lightroom). Использование штатива и программного управления будет способствовать уменьшению вибрации в процессе фотографирования для получения более качественных снимков. Также важно подобрать фон, на который будет ставиться чашка Петри. Фон не должен давать бликов (например, матовый материал) и должен быть водостойким.
Для оценки эффективности выклева артемии необходимо скачать и установить себе на компьютер программу ImageJ по вебссылке: http://imagej.nih.gov/ij/download/win32/ij148jdk6setup.exe или на сайте: http://imagej.nih.gov/ij/.

Для оценки эффективности выклева артемии
После установления открываем изображение с артемией после выклева.

191

При хорошем качестве фотоаппарата и изображения цисты и науплии различимы

При хорошем качестве фотоаппарата и изображения цисты и науплии различимы. На рисунке стрелкой выделены круглые цисты (т. е. оболочки, из которых выклюнулись артемии).

При хорошем качестве фотоаппарата и изображения цисты и науплии различимы
192
Стрелкой также выделены продолговатые науплии артемии.

Стрелкой также выделены продолговатые науплии артемии.
193
Для удобства визуализации можно инвертировать изображение: Plugins / Examples / IP Demo.

Для удобства визуализации можно инвертировать изображение: Plugins / Examples / IP Demo.
194
Далее регулируем яркость (Darken / Lighten).

Далее регулируем яркость (Darken / Lighten).
195
И выбираем Invert.
Круглые пятна – это оболочки (цисты).

Круглые пятна – это оболочки (цисты).
196
Продолговатые пятна – это науплии артемии.
Подсчет рачков осуществляют с помощью инструмента Multipoint.

Подсчет рачков осуществляют с помощью инструмента Multipoint.
197
Измеренное количество науплий можно увидеть в результатах подсчета: Analyze / Measure / Result.

Измеренное количество науплий можно увидеть в результатах подсчета: Analyze / Measure / Result.
198
Основным параметром для контроля является процент выклева науплий из цист через определенное количество времени (количество науплий / количество цист). Его контролировать через 24 и (или) 48 ч.
Исходное количество цист определяют на отдельном фото, которое делают непосредственно после закладки пробы на инкубацию.

Исходное количество цист определяют на отдельном фото, которое делают непосредственно после закладки пробы на инкубацию.
199
Для удобства подсчета изображение можно инвертировать.

Для удобства подсчета изображение можно инвертировать.
200
Ниже представлен образец оформления результатов оценки эффективности выклева артемии с помощью программы ImageJ.
Отчет о проведении оценки образцов артемии по параметру выклева. Для оценки артемии по параметру выклева (в %) поступило 3 образца. Инкубация цист артемии, а также подсчет науплий производились на основании общепринятых инструкций. Оценка каждого образца осуществлялась в пяти повторностях. Результаты оценки артемии по параметру выклева представлены в табл. 22.
Таблица 22. Результаты оценки артемии по параметру выклева

Результаты оценки артемии по параметру выклева
Примечание. Мean – среднее значение массы, SE – стандартная ошибка среднего, SD – стандартное отклонение, CV – коэффициент вариации, n – объем выборки, min – max – минимальное и максимальное значение.
Как видно из представленных в таблице данных, у образца 1 средний процент выклева составил 72,12 %, у образца 2 – 87,88 %, у образца 3 – 22,40 %, т. е. максимальный средний выклев был у образца 2.