Методы стимулирования созревания половых продуктов у производителей осетровых рыб

и практике искусственного разведения рыб существует три метода стимулирования созревания половых продуктов у производителей: экологический, физиологический и экологофизиологический.
Экологический метод, разработанный А.Н. Державиным (1932), основан на технологии содержания производителей реофильных видов рыб в садках или бассейнах до наступления овуляции у самок и появления спермы у самцов. При этом основными факторами, способствующими созреванию половых клеток, ЯВЛЯЮтся поддержание определенных скоростей течения, кислородного режима, температуры, стимулирующей размножение в период нереста, и галечный нерестовый субстрат.


Физиологический метод был разработан в 1940-е тоды одновременно в нашей стране и в Бразилии. Он основан на гормональной стимуляции созревания половых клеток у рыб Для перехода их в нерестовое состояние. В нашей стране данный метод был разработан научной школой Л.Н. Гербильского (1941) и получил название метода гипофизарных Инъекций (МГИ).
Эколого-физиологический метод предусматривает стимулирование созревания половых продуктов у производителей путем комбинированного воздействия на организм рыбы экологических факторов внешней среды и вводимых физиологи чески активных веществ. Это дает возможность рыбоводу получать в определенный срок необходимое количество икры и спермы, что позволяет Планировать работу рыбоводного предприятия на каждом этапе биотехнического процесса.
В современной практике промышленного осетреводства, как отечественной, так зарубежной, наиболее распространен физиологический метод.
В условиях тепловодных хозяйств половая зрелость самцов осетра наступает в возрасте 3-4 года, а самок - в возрасте 6-7 лет, стерлядь созревает в более ранние сроки: самцы в 2-3 года, самки - в 3-4 года. Зрелость самок определяют в ходе бонитировки производителей с октября по апрель. Оптимальная температура воды для производителей 13-16 °С.
При промышленном разведении осетровых необходим постоянный контроль завершающего этапа гаметогенеза у самок осетровых рыб независимо от их видовой принадлежности. С этой целью был разработан экспресс-метод определения степени зрелости гонад у производителей осетровых рыб (Казанский и др., 1978). Суть данного метода заключается в следующем: рыбу фиксируют в боковом положении; напротив 4-5-й жучки Вводят щуп под углом 45°; после погружения щуп проворачивают вокруг оси для захвата икринок (рис. 132): ранку обрабатывают раствором KMnO, и отпускают рыбу в бассейн.

Отбор икринок у стерляли с помощью щупа

Рис. 132. Отбор икринок у стерляли с помощью щупа
Цут представляет собой стальную толстую заостренную иглу с канавкой для сбора икринок. Толщина щупа зависит от видовой принадлежности самок осетровых рыб: для белуги диаметр составляет 6 мм, для осетра - 5 мм, севрюги и шиша — 3-4 мм, стерляди – 2,5-3 мм.
Икринки из канавки щупа препаровальной иглой вынимают в чашку Петри и заливают 4 %-ным раствором «формалина или в течение 5 минут варят в кипящей воде. Затем не менее 10 икринок вскрывают лезвием и при помощи бинокуляра определяют расстояние от ядра ооцитов (к анимальному полюсу) до внутренней оболочки икринки (рис. 133, 134).
Расчет величины коэффициента поляризации ооцита производится по формуле:
К = L 100 %, где к– коэффициент поляризации ооцита; L - расстояние от верхней части ядра до оболочки икринки; L - расстояние от нижней части икринки до анимального полюса.
Оптимальные значения величины коэффициента поляризации ооцитов у осетровых рыб в преднерестовом состоянии должны быть в пределах 59%. Более низкое значение этого показателя

Стадии зрелости ооцитов осетровых рыб (по литературным данным - Mims et al., 2002)

Рис. 133. Стадии зрелости ооцитов осетровых рыб (по литературным данным - Mims et al., 2002)

Рис. 134. Схема выполнения промеров ооцита для расчета коэффициента поляризации
указывает на начало резорбции икры, а более высокое подтверждает незавершенность четвертой стадии зрелости самок. Такие рыбы требуют дополнительного выдерживания в прудах или в бассейнах при нерестовой температуре с учетом видовых особенностей рыб.
Для приготовления инъекций используются гипофизы, которые предварительно заготавливают на промысловых участках от рыб, находящихся в преднерестовом состоянии, поскольку их железы имеют наибольшую концентрацию гонадотропных гормонов. Гипофизы обезвоживают и обезжиривают химически чистым ацетоном, высушивают и складывают в плотно закрывающиеся пузырьки или пробирки. В таких условиях эти органы могут храниться, сохраняя свою активность, в течение нескольких лет. Перед проведением инъекций гипофизы измельчают в ступке, добавляют небольшое количество физиологического раствора и вводят с помощью шприца определенное количество суспензии в Мышцы спины рыбы.
Гонадотропная активность препарата определяется с помощью тест-объектов, в качестве которых используют самок вьюна или самцов лягушек. Инъекцирование в зимние месяцы салкам Вьюна препарата гипофиза дает возможность получать четкую положительную и стабильную реакцию на созревание их половых продуктов. Это позволяет провести количественные измерения и дать определение единицы гонадотропной активности гипофиза – вьюнової единицы (BE). Для определения активности препарата гипофиза во Вьюновых единицах используют несколько групп самок вьюна с гонадами в IV стадии зрелости и индивидуальной массой 35-40 г. При температуре 16-18 °C всем им одновременно делают гипофизарные инъекции различной дозировки. Минимальная Дозировка препарата гипофиза (мг). которая вызывает у одной самки вьюна созревание ооцитов и овуляцию, соответствует вьюновой единице.
Таким же образом проверяют активность препарата гипофиза на самцах лягушек. Положительной реакцией считается появление подвижных сперматозоидов в клоаке самца после инъекции суспензии гипофиза в спинные лимфатические мешки при температуре 18-22 "C. При этом гонадотропная активность гипофиза выражается в лягушачьих единицах (ЛЕ) – минимальном весовом количестве препарата гипофиза, которое вызывает реакцию спермиации у одного самца лягушки.
Биологическое тестирование позволяет оценивать и сравнивать содержание гонадотропного гормона в различных партиях заготовленных ацетонированных гипофизов. 1 мг препарата ацетонированного гипофиза сазана обычно соответствует 1ЛЕ, 1 мг ацетонированного вещества гипофиза осетра - 3,3 ЛЕ.
Для гормональных инъекций осетровым рыбам помимо гипофиза осетра используют гипофиз карпа или лосося, а также синтетические аналоги. Например, LH-RHa (Luteinizing Hormone - Releasing Hormone Ethylamide) или GnRHa (Gonadotropin Releasing Hormone Ethylamide) (табл. 22).
В связи с сокращением в естественных водоемах промысловых запасов сазана и осетра, гипофизы которых широко использовались в на 1 мл физиологического раствора. Сроки созревания тем короче, чем выше температура воды. При средней температуре воды 13,5-15 "Синьепирование самок и самцов желательно проводить в 21-22 часа, чтобы сбор икры пришелся через день на рабочие часы.
Важнейшей задачей для рыбовода является точное определение срока, когда следует брать икру у самки. При преждевременном взятии икры большая часть ооцитов прочно соединена с ястыком и не отделяется, ооциты, с усилием отделенные от ястыка и оставшиеся внутри фоликулов. не оплодотворяются, поскольку стенка полликула препятствует контакту сперматозоидов с яйцом. При передержке самки позінсе срока полной овуляции всей икры яйца, оставшиеся в полости тела, повреждаются, после оплодотворения дают большой процент уродств или травмируется и не пригодны для воспроизводства. Это так называемая «перебитая», или «перезрелая икра.
Лучше всего оплодотворяются и развиваются яйца, отложенные сетчатвенным путем п пе - держанные в полости Тела, и яйца, легко отделяющиеся от яичника. Во избежание потери икры от перезревания или недозревания самок после ги хризарі ой инъекции целесообразно пользоваться графиками зависимости продолжительности созревания от температуры воды.
в практике рыбоводства часто возникает проблема возможности искусственного осеменения икры после нескольких часов ее нахождения в полости Тела снулой самки или отцеженной в емкость без воды. Это явление называется постовулярным перезреванием, или передержкой икры, оно часто наблюдается при применении гипофизарных инъекций. Так, у русского осетра продолжительность сохранения способности к оплодотворения яиц в теле самки или вне его составляет 2-3 часа при температуре 18 20 °С.
Получение половых продуктов от текучих. находящихся в пятой стадии зрелости, производителей производят в затененном месте или помещении, поскольку прямой солнечный свет губительно действует на икру н сперму. Икру удобнее всего собирать в эмалированные миски или тазы. Посуда для отцеживания половых продуктов должна быть с ровной поверхностью и абсолютно сухой, так как во влажной посуде происходит активация икры, что егко обнаружить по ее набуханию. Это препятствует оплодотворению и значительно снижает количество развивающей

Таблица 22 Дозировки препаратов гипофиза и их аналогов

Дозировки препаратов гипофиза и их аналогов

Према, 1-я иньекция предварительная - для самок 10 % от обичсй д?з?ы ло 24 час он до получения нры: 2-71 ины-кция разрешајщая — 90 % (уг общеlі дозы, через 12 часов после первой; тя самов одна инъекция, за 12-24 часов до біло?ТВорсія.
рыбоводстве, возникла необходимость их замены другими гормональными препаратами. Разработки таких препаратов ведутся в трех направлениях: первое из них связано с заменоіі Г)надотропина гипофиза рыб другими горадотропными препаратами, Hмскицими гипофизарное или ПлацCIIтарное происхождение, второ - с неспользоваІнсм ри.Лизинг-гормона, который мог бы активизировать собственный гипофиз рыбы, и третье – с использованием стероидных гормонов, которые воздействуют па фоциты, вызывая их созревание и овуляцию.