МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА - Проведение исследований


Основные исследования проводились на базе мобильной рыбоводной лаборатории (МРЛ) КГТУ и промышленной УЗВ ООО «ТПК Балтптицепром», г. Калининград. Весь материал по теме диссертации был собран в период с апреля 2011 по декабрь 2016 г.


Работы по получению потомства и выращиванию молоди проводили в МРЛ КГТУ. На этапе подращивания и выращивания личинок использовали бассейны из прорезиненной ткани объемом до 0,2 м3 с уровнем воды 0,2 м. Водообмен составлял 1 раз в час. По достижении мальками средней массы 1 г, уровень воды в бассейнах повышали до 0,4 м, объем воды возрастал до 0,4 м3. Водообмен оставался прежним (рисунок 3).

Бассейны мобильной рыбоводной лаборатории (МРЛ)

Рисунок 3 – Бассейны мобильной рыбоводной лаборатории (МРЛ)
В составе технических узлов бассейнового участка МРЛ входили: сетчатый механический фильтр, биофильтр-биореактор «кипящего слоя» с загрузкой гранулированного полиэтилена (диаметром 3 мм), бактерицидные лампы для обеззараживания воды и оксигенатор напорного типа.

Работы по формированию ремонтно-маточного стада форели проводили в 2011 – 2013 гг. на базе в УЗВ ООО «КМП Аква» (рисунок 4) и промышленной УЗВ предприятия ООО «ТПК Балтптицепром» (рисунок 5).

В 2013 г. молодь форели перевезли в цех для производителей предприятия ООО «ТПК Балтптицепром» и продолжили работы по формированию второй генерации ремонтно-маточного стада. Промышленная УЗВ представляла собой модульную систему (рисунок 6), каждый блок которой включал в себя четыре пластиковых бассейнов шестиугольной формы объемом 3 м3 и четыре квадратных бассейна объемом 1,6 м3. В состав технических узлов также входили механический
фильтр со стабильным наклонным сетным полотном ячеей 0,3 мм, дегазатор, биофильтры «кипящего слоя» (биореактор) с загрузкой гранулированного полиэтиле-

Рыбоводные бассейны УЗВ ООО «КМП Аква»

Рисунок 4 – Рыбоводные бассейны УЗВ ООО «КМП Аква»

Рисунок 5 – Рыбоводные бассейны УЗВ ООО «ТПК Балтптицепром»
 
на, ультрафиолетовое устройство и конусообразный оксигенатор напорного типа из нержавеющей стали.
1 – бассейны, 2 – механический фильтр, 3 – насосы, 4 – биофильтр, 5 – дегазатор, 6 – подпитка из скважины, 7 – генератор кислорода, 8 – оксигенатор, 9 – ультрафиолетовые лампы

Схема УЗВ на предприятии ООО «ТПК Балтптицепром»

Рисунок 6 – Схема УЗВ на предприятии ООО «ТПК Балтптицепром»


Для производства кислорода использовался кислородный генератор Atlas Capco GX11FF (PLC, Nacka, Sweden). Температура воды в установке цеха производителей поддерживалась за счет нагрева или охлаждения воздуха в помещении с помощью регулировки рабочего режима панельных радиаторов отопления. Уровень воды в бассейнах составлял 0,4 – 1 м. Циркуляция воды осуществлялась за счёт насоса производительностью 20 м3/ч. Ежедневная подмена воды составляла 10 %.
Контроль за температурой воды и содержанием растворенного в воде кислорода проводили ежедневно перед каждым кормлением с помощью оксиметра «Hanna Instruments - 9145». Величину водородного показателя и содержание нитритов определяли раз в 3 суток с помощью отечественного иономера «Аквилон И- 500». Контрольные взвешивания осуществляли раз в 10 дней на этапах выдерживания предличинок, подращивания и выращивания личинок на торсионных весах с точностью до 1 мг и раз в 15 дней на электронных весах с точностью до 0,1 г на этапах выращивания мальков и рыб более старшего возраста. Рыб массой более 0,8 кг взвешивали раз в месяц. Объем выборки при проведении контрольных обловов составлял 1 % от общего количества рыб в рыбоводной ёмкости.
На этапах подращивания, выращивания личинок и мальков использовали стартовый корм датской фирмы Aller Aqua (A/S, Christiansfeld, Denmark) рецептуры Aller Futura. При выращивании рыб более старшего возраста использовали продукционные корма фирмы Aller Aqua следующих рецептур: Aller Bronze и Aller Trident. Фракцию 3,2 мм применяли до достижения рыбами массы близкой к 100 г, фракцию 4,5 мм весь оставшийся период до завершения 1-го этапа исследований.
По достижении рыбами массы 600 г переходили на корма для производителей рецептуры Aller Sturgeon REP EX. Размер крупки и гранул изменяли по мере роста рыб. Суточные дозы кормления устанавливали в соответствии с рекомендуемыми нормами данного производителя [208]. Коррективы в них вносили с учетом поедаемости корма.
Отход форели учитывали ежедневно, методом прямого учёта. Выживаемость рыб выражали в процентах от общего числа наблюдаемых рыб [203].
Для оценки скорости роста рыбы использовали показатели общепродукционного коэффициента массонакопления и величину относительного среднесуточного прироста.
Скорость роста как объемную функцию весового роста определяли по формуле (1) общепродукционного коэффициента массонакопления [67, 68, 130]:
формула общепродукционного коэффициента массонакопления, (1)
где Мн и Мк – масса рыб начальная и конечная, г; ?Т – продолжительность периода выращивания, суток.
Скорость роста как линейную функцию весового роста определяли по величине относительного среднесуточного прироста:

С = ((Мк - Мн)*2*100)/(Мн+Мк)*Т , (2)


где Мн и Мк – масса рыб начальная и конечная, г; Т – период выращивания, сут.
Эффективность кормления оценивали по величине кормового коэффициента.
Величину этого показателя определили по формуле [124]:
Кк =Р /П, (3)
где Р – количество корма, использованного в периоды между контрольными обловами, кг; П – прирост общей массы рыб в периоды между контрольными обловами, кг.
Измерения морфометрических показателей проводили по схеме, предложенной И.Ф. Правдиным [124]. Визуализация измеряемых у самцов и самок показателей представлена на рисунке 7.
ab – длина всей рыбы; ad – длина бес С; od – длина туловища; an – длина рыла; np - диаметр глаза (горизонтальный); ao – длина головы; po – заглазничный отдел головы; lm – высота головы у затылка; qh – наибольшая высота тела; ik – наименьшая высота тела.

 

Схема измерений радужной форели (по И.Ф. Правдину, 1966)
Рисунок 7 – Схема измерений радужной форели (по И.Ф. Правдину, 1966) [124]

Пластические признаки анализировали в системе индексов. По данным измерений и взвешиваний рассчитывали селекционные индексы: коэффициент упитанности (Ку=100 Р/L), относительная длина головы (C/L, %), относительная высота тела или индекс прогонистости (H/L, %), индекс наибольшего обхвата тела или компактности (O/L, %). Морфофизиологические анализы проводили путем вскрытия рыбы и извлечения внутренних органов (печень, селезенка), а также кожи и жабр с последующим определением их массы. Для определения индекса внутренних органов использовали метод морфофизиологических индикаторов [128, 156, 201]. Выделенные органы взвешивали на торсионных весах ВЛК-500 с точностью до 0,1 г и выражали в процентах к массе тела. Для исследований отбирались клинически здоровые рыбы без видимых повреждений.
Гематологические показатели определяли, по стандартным методикам, принятым в рыбоводстве [29, 88, 111]. Концентрацию эритроцитов определяли пробирочным методом с использованием консервирующего раствора, микроскопа и камеры Горяева, лейкоцитов - косвенным методом на мазке крови, гемоглобина - гемиглобинцианидным методом на спектромоме, общего белка в сыворотке крови – рефрактометрически, скорость оседания эритроцитов – в СОЭ-метре, содержание гемоглобина в одном эритроците и цветной показатель – расчетным методом [88].
Подсчет лейкоцитарной формулы осуществляли на фиксированных мазках, окрашенных по Паппенгейму. На каждом мазке подсчитывали 200 лейкоцитов с учетом стадий их цитогенеза по классификации Н.Т. Ивановой 

Идентифицировали следующие виды лейкоцитов: миелоциты нейтрофильные, метамиелоциты нейтрофильные, палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы, псевдобазофилы, моноциты и малые лимфоциты [25].
Отлов рыбы производили непосредственно перед проведением исследования - использовали активную и клинически здоровую рыбу, без видимых повреждений.
Забор крови осуществляли прижизненно из гемального канала хвостового стебля (рисунок 8). Рыбу перед проведением анализов не кормили в течение суток.
В качестве основных иммунологических показателей исследовали такие показатели, как бактерицидная активность, концентрация лизоцима и гамма – глобулинов. Исследования были проведены в лабораторных условиях по модифицированным методикам [90]. Содержание сывороточного лизоцима определяли по методике О.В. Бухарина [18].

Взятие крови из гемального канала рыбы

Рисунок 8 – Взятие крови из гемального канала рыбы
Относительное содержание ?-глобулинов находили через показатель оптической плотности (ОП). Определение ОП проводили сначала в пробирке No4, затем в пробирках No3, 2 и 1 (рисунок 1). Расчет результатов производился по схеме:
ОП пробирки No1 - ОП пробирки No 2 = ОП альбуминов;
ОП пробирки No2 - ОП пробирки No3 = ОП альфа-глобулинов;
ОП пробирки No3 - ОП пробирки No4 = ОП бета-глобулинов;
ОП пробирки No4 = ОП гамма-глобулинов.
Принимая сумму ОП альбуминов и всех глобулиновых фракций за 100% (ОП пробирки No1), вычисляли долю содержания каждой фракции в процентах.
Процентное содержание гамма-глобулинов определяли по формуле 4:
Процентное содержание гамма-глобулинов определяли по формуле(4)
где ОПgg – гамма-глобулин (ОП – пробирки No 4), Е0n – сумма ОП всех белковых фракций (ОП пробирки No1), 100 – коэффициент перевода содержания гамма- глобулина в %.
Расчет величины показателей бактериостатической активности (5) и напряженности бактериостатической активности (6) проводили по формулам:


БА (%) =100 – (100*(Дк – Дн))/Д`к – Д`н, (5)

где Дн – оптическая плотность начальная; Дк – оптическая плотность конечная.
100-коэффициент перевода оптической плотности в % [144].


НБА (%) = (Ан*Тн + Ак*Тк)/Т+1, (6)

где Ан – оптическая плотность начальная; Ак – оптическая плотность конечная; Тн – оптическая плотность начальная; Тк – оптическая плотность конечная.
Собранный материал был статистически обработан по общепринятым методикам [2, 71, 118]. Обработка данных выполнена с помощью программы «Microsoft Excel». При статистической обработке определяли следующие параметры признаков: среднеарифметические значения (M); стандартная ошибка среднего (m); среднеквадратичное отклонение (?). Для определения достоверности различий использовали непарный параметрический критерий Стьюдента.